淺析細胞凋亡試劑盒使用注意事項

　　細胞凋亡試劑盒是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡試劑盒。可以使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。

　　細胞凋亡是指細胞在生長到一定階段及某些生理過程中，會受到多因素和機制的嚴格調控而進入死亡。這是一個動態的過程，會涉及一系列復雜的生化反應， 是一個需要酶參與的級聯反應，同時也涉及不同基因的表達及調控、信號傳導。其中有幾項生理過程能被用來檢測凋亡的發生，因此多參數分析法對于準確檢測這一過程十分重要。同時，了解細胞死亡和存活機制也是毒理分析和藥物研發應用中一個非常關鍵的內容。

　　細胞凋亡的經典進程：

　　1.Caspase的激活在凋亡信號響應中起關鍵作用；

　　2.線粒體膜電位降解；

　　3.Caspase繼續引發關鍵的蛋白水解表達凋亡相關蛋白；

　　4.細胞膜組成改變，作為引發凋亡細胞的內吞作用的信號；

　　5.DNA片段化，基因組的打斷是凋亡過程中-個不可逆的過程。

　　注意事項：

　　1.盡管經測試細胞凋亡試劑盒反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。

　　2.如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。

　　3.染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。

　　4.如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解細胞凋亡試劑盒，導致染色失敗。

　　5.熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。

　　6.用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。

　　7.需自備PBS。

　　8.細胞凋亡試劑盒僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

　　9.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。