淺析細(xì)胞凋亡試劑盒使用注意事項(xiàng)

　　細(xì)胞凋亡試劑盒是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡試劑盒。可以使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。

　　細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生長到一定階段及某些生理過程中，會(huì)受到多因素和機(jī)制的嚴(yán)格調(diào)控而進(jìn)入死亡。這是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，會(huì)涉及一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)， 是一個(gè)需要酶參與的級聯(lián)反應(yīng)，同時(shí)也涉及不同基因的表達(dá)及調(diào)控、信號傳導(dǎo)。其中有幾項(xiàng)生理過程能被用來檢測凋亡的發(fā)生，因此多參數(shù)分析法對于準(zhǔn)確檢測這一過程十分重要。同時(shí)，了解細(xì)胞死亡和存活機(jī)制也是毒理分析和藥物研發(fā)應(yīng)用中一個(gè)非常關(guān)鍵的內(nèi)容。

　　細(xì)胞凋亡的經(jīng)典進(jìn)程：

　　1.Caspase的激活在凋亡信號響應(yīng)中起關(guān)鍵作用；

　　2.線粒體膜電位降解；

　　3.Caspase繼續(xù)引發(fā)關(guān)鍵的蛋白水解表達(dá)凋亡相關(guān)蛋白；

　　4.細(xì)胞膜組成改變，作為引發(fā)凋亡細(xì)胞的內(nèi)吞作用的信號；

　　5.DNA片段化，基因組的打斷是凋亡過程中-個(gè)不可逆的過程。

　　注意事項(xiàng)：

　　1.盡管經(jīng)測試細(xì)胞凋亡試劑盒反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。

　　2.如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測效果。

　　3.染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。

　　4.如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解細(xì)胞凋亡試劑盒，導(dǎo)致染色失敗。

　　5.熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。

　　6.用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。

　　7.需自備PBS。

　　8.細(xì)胞凋亡試劑盒僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

　　9.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。