清楚這些內容，使用cck8檢測試劑盒不再是難題！

　　cck8檢測試劑盒為MTT 法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。

　　使用說明：

　　一、制作標準曲線（測定細胞具體數量時 （測定細胞具體數量時）

　　1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

　　2、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度，每組 3-6 個復孔。

　　3、接種后培養至細胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養時間。）

　　二、細胞活性檢測

　　1、在 96 孔板中接種細胞懸液（100?L/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在 37℃,5% CO2 的條件下）。

　　2、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。

　　3、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。

　　4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

　　5、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。

　　三、細胞增值-毒性檢測

　　1、在 96 孔板中配置 100  µL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時（在 37 ℃，5% CO2 的條件下）。

　　2、向培養板加入 10 µL不同濃度的待測物質。在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24 或 48 小時）。

　　3、向每孔加入 10  µLCCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。

　　4、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。

　　5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

　　6、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。