細(xì)胞凋亡試劑盒的使用，需要注意什么？

　　細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡是為維持環(huán)境穩(wěn)定，為更好的適應(yīng)勝春環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等作用，是一種字體損傷的現(xiàn)象。

　　細(xì)胞凋亡試劑盒原理

　　細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一種分子量為35.8 KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V結(jié)合到凋亡細(xì)胞后，在藍(lán)色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞。碘化丙啶是一種核酸染料，它不能穿透完整細(xì)胞膜，但對凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。將FITC-Annexin V與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞區(qū)分開來。

　　使用細(xì)胞凋亡試劑盒的注意事項

　　1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

　　2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質(zhì)，在保存與操作時請注意避光。

　　3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。

　　4.在細(xì)胞洗滌的最后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實驗結(jié)果。

　　5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進(jìn)行Annexin V-FITC染色，上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。

　　6.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。

　　7.反應(yīng)完畢后請盡快檢測，因為細(xì)胞凋亡是一個動態(tài)的過程，反應(yīng)1小時后熒光強(qiáng)度就開始衰變。

　　8.細(xì)胞凋亡試劑盒成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類型、細(xì)胞膜上PS的密度、發(fā)生凋亡時PS翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時間等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對實驗成功是非常必要的。