• <rt id="wwsuc"><acronym id="wwsuc"></acronym></rt>
    <tfoot id="wwsuc"></tfoot>
  • 歡迎來到北京博奧森生物技術有限公司網站!
    咨詢熱線

    4009019800

    當前位置:首頁  >  技術文章  >  蛋白的3種提取方法

    蛋白的3種提取方法

    更新時間:2022-05-17  |  點擊率:2847
      1.單層貼壁細胞總蛋白的提取
     
      倒掉培養(yǎng)液,并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液(或將瓶直立放置一會兒使殘余培養(yǎng)液流到瓶底然后再用移液器將其吸走)。
     
      每瓶細胞加3ml 4℃預冷的PBS(0.01M pH=7.2~7.3)。平放輕輕搖動1min洗滌細胞,然后棄去洗液。重復以上操作兩次,共洗細胞三次以洗去培養(yǎng)液。將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上。
     
      按1ml裂解液加10μl PMSF(100mM),搖勻置于冰上。(PMSF要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。)
     
      每瓶細胞加400μl含PMSF的裂解液,于冰上裂解30min,為使細胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經常來回搖動。
     
      裂解完后,用干凈的刮棒將細胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(動作要快),然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。(整個操作盡量在冰上進行。)
     
      于4℃下12000 rpm離心5min。(提前開離心機預冷)將離心后的上清分裝轉移倒0.5min的離心管中放于-20℃保存。
     
      
     
      2.組織中總蛋白的提取
     
      將少量組織塊置于1~2ml勻漿器中球狀部位,用干凈的剪刀將組織塊盡量剪碎。
     
      加400μl單去污劑裂解液裂(含PMSF)于勻漿器中,進行勻漿。然后置于冰上。
     
      幾分鐘后再碾一會兒再置于冰上,要重復碾幾次使組織盡量碾碎。
     
      裂解30min后,即可用移液器將裂解液移至1.5ml離心管中,然后在4℃下12000 rpm離心5min,取上清分裝于0.5ml離心管中并置于-20℃保存。
     
      加藥物處理的貼壁細胞總蛋白的提取由于受藥物的影響,一些細胞脫落下來,所以除按1)操作外還應收集培養(yǎng)液中的細胞。
     
      
     
      3.培養(yǎng)液中細胞總蛋白的提取
     
      將培養(yǎng)液倒至15ml離心管中,于2500 rpm離心5min。
     
      棄上清,加入4ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌,然后2500 rpm離心5min。棄上清后用PBS重復洗滌一次。
     
      用槍洗干上清后,加100μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30min,裂解過程中要經常彈一彈以使細胞充分裂解。
     
      將裂解液與培養(yǎng)瓶中裂解液混在一起4℃、12000 rpm離心5min,取上清分裝于0.5ml離心管中并置于-20℃保存。
     
    亚洲国产成人精品久久久国产成人一区二区三区综 | 999久久久免费精品国产| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩精品久久久久久久电影| 久久精品一区二区三区资源网 | 99国产精品视频久久久久| 久久夜色精品国产www| 久久中文字幕网站篠田优| 亚洲国产成人久久笫一页| 2020久久精品国产免费| 久久免费观看国产精品| 精品国产自在现线久久| 99久久无色码中文字幕人妻蜜柚 | 精品久久久久久中文字幕| 色综合久久综精品| 久久国产精品二区99| 中文字幕精品无码久久久久久3D日动漫| 亚洲国产成人久久精品软件| 久久精品九九亚洲精品| 97精品国产91久久久久久| 精品香蕉久久久午夜福利| 亚洲精品伊人久久久久| 999久久久免费精品播放| 久久久久久久99精品免费| 久久亚洲国产精品一区二区| 久久99精品久久久久久9蜜桃| 久久久亚洲裙底偷窥综合| 久久夜色精品国产尤物| 久久这里只有精品首页| 亚洲精品乱码久久久久久| 一本色道久久综合亚洲精品高清| 亚洲国产成人久久精品99 | 99久久99热精品免费观看国产| 久久午夜夜伦鲁鲁片无码免费| 日韩精品久久久久久| 久久精品国产99国产精偷| 亚洲午夜久久久久久噜噜噜| 亚洲中文字幕久久精品无码APP | 国内精品久久久人妻中文字幕| 久久久久综合中文字幕| 精品久久久久久国产牛牛app|